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層析實(shí)驗(yàn)冷柜廠家講解離子交換層析的操作

 更新時(shí)間:2015-11-09    點(diǎn)擊量:3436
 1、離子交換劑的選擇
 
   選擇理想的交換劑是提高分辨率和有效成分獲得率的重要前提:選擇交換劑時(shí)應(yīng)從如下幾方面加以考慮。首先要選擇對陽離子交換劑或陰離子交換劑,使被分離物質(zhì)的電9荷與交換劑平衡離子的電荷正負(fù)性相同。對于兩性離子,應(yīng)根據(jù)其在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)所帶的電荷選擇交換劑。其次要對強(qiáng)弱離子交換劑進(jìn)行選擇。離子交換層析中一般不用中強(qiáng)度的交換劑。強(qiáng)性離子交換劑常用于無離子水的制備和分離一些在pH時(shí)較穩(wěn)定的化合物。分離生物樣品習(xí)慣于弱性離子交換劑。第三要選擇平衡離子。為了提高交換容量,一般要選擇親合力較小的平衡離子。強(qiáng)性交換劑應(yīng)分別選擇H型和OH型。弱性交換劑應(yīng)分別選擇Na型或Cl型。離子交換樹脂含活性基團(tuán)多、交換容量大、機(jī)械強(qiáng)度高、流動(dòng)速度快,主要用于分離無機(jī)離子和氨基酸核苷酸等小分子物質(zhì)。大分子化合物要用多糖類離子交換劑,因?yàn)檫@些交換劑的電荷基團(tuán)分布在其表面,大分子化合物要用可很容易的和它們起交換反應(yīng)。
 
2、緩沖液的選擇
 
    緩沖液的選擇原則4條:
①陰離子交換劑選用陽離子緩沖液(如氨基乙酸、銨鹽、Tris等),陽離子交換劑選用陰離子緩沖液(如乙酸鹽、磷酸鹽等),以防緩沖離子參與交換過程,降低交換劑的交換容量。
②緩沖液pH值的選擇要使被分離物質(zhì)的電荷與平衡離子電荷的正負(fù)性相同。
③選用的緩沖系統(tǒng)對分離過程無干擾。
④要確定一定的離子強(qiáng)度。
 
3、離子交換劑的制備
 
   離子交換劑的制備有如下幾個(gè)步驟:
①漂洗目的是除去雜質(zhì)。無論是新啟用的,還是再生的交換劑,在處理或轉(zhuǎn)型前都要經(jīng)過這一步。漂洗是將交換劑在大燒杯中用低于40℃的水反復(fù)洗滌,用傾倒法除去細(xì)小顆粒(這一步一定要到做位。留下細(xì)小顆粒會(huì)堵塞層析柱下的尼龍網(wǎng)眼。)直至水清澈無色。
②處理用酸堿輪換浸泡,以便使交換劑帶上需要的平衡離子。處理方法為,樹脂可用2一4倍0.5mol/LNaoH或0.5momol/LHCI溶液處理。纖維素和葡聚糖只能用0.5mol/LNaoH+0.5mol/LNacl混合溶液或0.5mol/LHCl處理。處理順序決定于交換劑攜帶的平衡離子.每次用酸或堿處理后,勻應(yīng)用水洗至中性.處理的目的除使交換劑帶上所需離子外,還可增加交換容量.樹脂來講,通過處理,樹脂充分吸水溶脹,使網(wǎng)孔開大,更有利于小分子物質(zhì)進(jìn)到顆粒內(nèi)部進(jìn)行交換反應(yīng)。對于纖維素離子交換劑來講,干的交換劑由于眾多氫鍵的作用,使纖維素分子壓的非常密實(shí),導(dǎo)致許多電荷基團(tuán)被埋藏起來當(dāng)交換劑經(jīng)過酸、堿處理后,其電荷基團(tuán)都轉(zhuǎn)變?yōu)閹щ娦问剑弘姾苫鶊F(tuán)帶有同種電荷,則由于電荷的排斥作用使交換劑得到大程度的膨脹,電荷基團(tuán)充分暴露,從而有利于離子平衡和交換反應(yīng)。由于強(qiáng)酸強(qiáng)堿可能使這類交換劑分解,所以使用濃度應(yīng)控制在0.5mol/L以內(nèi),處理時(shí)間不應(yīng)超過1.5小時(shí)。
③平衡、經(jīng)處理后,要用大量的水懸浮交換劑,后用緩沖液平衡。
④再生使用過的交換劑,可用一定的方法使其恢復(fù)到原來的狀
⑤轉(zhuǎn)型離子交換劑有時(shí)需要從一種平衡離子轉(zhuǎn)換成另一種平衡離子,這種平衡離子的轉(zhuǎn)換過程叫轉(zhuǎn)型。轉(zhuǎn)型是用含欲轉(zhuǎn)換平衡離子的溶液處理交換劑。

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